ІНСТРУКЦІЯ
для медичного застосування
набору реактивів для імунорадіометричного аналізу
поверхневого антигену гепатиту В з використанням радіонукліду 125І
( ІРМА-НBsAg-125І )
Kit of reactants for immunoradiometric assay of antigene superficial hepatites B for use radionuklide 125I ( ІRМА-НBsAg-125І )
|
Загальна характеристика:
склад набору:
Препарат 125І–антитіла до HBsAg ( по 5,5 мл ) з активністю
у флаконі 85-185 кБк - 2 флакони,
позитивний контрольний зразок HBsAg ( 0,7 мл ) - 1 флакон,
негативний контрольний зразок HBsAg ( 1,5 мл ) - 1 флакон,
пробірки з імобілізованими моноклональними антитілами - 100 шт.
Фармакотерапевтична група. Діагностичні радіо фармацевтичні засоби. Код АТС V-09.
Призначення набору. Набір призначений для кількісного визначення наявності поверхневого антигену гепатиту В у малому об’ємі сироватки або плазмі крові людини методом конкурентного імунорадіометричного аналізу “іn-vitro”.
Характеристика набору. Набір розрахований на проведення аналізу в дублікатах 40x2 дослідних проб, 6 проб позитивного і 14 проб негативного контрольних зразків HBsAg (усього 100 визначень).
Запобіжні заходи при роботі з набором. Реактив 125І - антитіла до HBsAg є джерелом м'якого гамма-випромінювання. Період піврозпаду радіонукліду 125І - 60,04 доби.
При роботі з набором треба додержуватися правил роботи з радіо активними речовинами (РР) за групою В (Норми радіаційної безпеки НРБУ-97 та Основні санітарні правила протирадіаційного захисту (ОСПУ) роботи з радіо активними речовинами й іншими джерелами іонізуючих випромінювань).
Увага!
Хімічний посуд і устаткування, що використовуються при роботі з РР, повинні бути відповідним чином марковані і зберігатися окремо.
Забороняється при роботі з РР мати на робочому місці стороннє устаткування й особисті речі.
Категорично забороняється прийом їжі, використання косметичних засобів, паління в помешканнях, призначених для роботи з РР.
У сироватці крові, використаної як компонент набору, не виявлено вірусів ВІЛ і гепатиту В. Проте компоненти набору слід розглядати як потенційне джерело вірусної інфекції і використовувати при роботі з набором одноразові гумові або пластикові рукавички.
Устаткування і матеріали, необхідні для проведення аналізу:
Напівавтоматичні піпетки зі змінними наконечниками, що дозволяють
відбирати обсяги рідин 0,1; 1,5;
штатив для пробірок;
водоструминий насос;
гамма-лічильник, що дозволяє вимірювати активність ізотопу [125J];
стрічка поліетиленова з липким шаром або плівка поліетиленова;
дистильована вода.
Підготування реагентів для аналізу. Перед початком роботи всі компоненти набору повинні мати кімнатну температуру (+18... +250С).
Проведення аналізу.
Пронумерувати пробірки. Необхідну кількість пробірок вибрати з розрахунку:
на позитивний контрольний зразок - 3 пробірки (пробірки 1 - 3),
на негативний контрольний зразок - 7 пробірок (пробірки 4 - 10),
на кожний невідомий зразок сироватки - 2 пробірки (по дві на кожну аналізовану сироватку, наприклад, пробірки 11,12. .... 99, 100).
Вставити пробірки в штатив для пробірок. Розкрити флакони.
У пронумеровані пробірки внести за допомогою піпетки реактиви; у пробірки 1 - 3 -
позитивний контрольний зразок HBsAg по 0,1 мл; у пробірки 4 - 10 - негативний контрольний зразок HBsAg по 0,1 мл; у пробірки II, 12 - 99, 100 - аналізовану сироватку або плазму по 0,1 мл.
Розчини в пробірки вносити, доторкаючись наконечником піпетки до внутрішньої поверхні стінки пробірки біля самого дна. Легким постукуванням по пробірках домогтися горизонтальності рівня рідини в них.
Закрити пробірки поліетиленовою стрічкою з липким прошарком або поліетиленовою плівкою, яку необхідно прикріпити до штатива тонким гумовим кільцем.
Витримати пробірки 12-16 годин при температурі 18-25°С.
Видалити вміст пробірок за допомогою водоструминного насоса з пасткою для збору рідини.
Промити пробірки дистильованою водою порціями по 1,5 мл. Операцію промивання повторити три рази, старанно видаляючи воду з пробірок за допомогою водоструминного насоса з пасткою для збору рідини після кожного промивання.
Витягти флакон з реактивом 1-антитіла до НВsАg із коробки. Витримати 30-40 хвилин при температурі 18-25°С.
Розкрити флакон з реактивом 1-антитіла до НВsАg.
Внести в кожну пробірку по 0,1 мл реактиву 1-антитіла до НВsАg .
Стежити за тим, щоб весь реактив потрапив на дно пробірки. Легким постукуванням по пробірках домогтися горизонтальності рівня рідини в них.
Закрити пробірки поліетиленовою стрічкою з липким прошарком або поліетиленовою планкою, яку необхідно прикріпити до штатива тонким гумовим кільцем.
Витримати пробірки 4-6 годин при температурі 18-25°С.
Видалити вміст пробірок за допомогою водоструминного насоса з пасткою для збору рідини.
Промити пробірки дистильованою водою порціями по 1,5 мл шість разів, старанно видаляючи воду з пробірок за допомогою водоструминного насоса з пасткою для збору рідини. Останню порцію рідини видалити найбільш старанно.
Виміряти активність 125I у кожній пробірці за допомогою гамма-лічильника. Час виміру –
I хвилина.
Розрахунки.
Визначити кількість фонових імпульсів - (Nф), що реєструються лічильником за I хвилину, експлуатуючи лічильник у режимі роботи " Вимір" 5 хвилин (С) без внесення в нього радіо активного зразка.
Фон лічильника (Nф) знайти за формулою:
С
Nф= ------- .
5
Обчислити середню кількість (А) зареєстрованих лічильником імпульсів при вимірі позитивних контрольних зразків у пробірках 1-3 за формулою:
N1 +N2+N3
А= ------------------- - Nф .
3
Розрахувати середню кількість (В) зареєстрованих лічильником імпульсів при зміні активності негативних контрольних зразків у пробірках 4-10 за формулою:
N4 +N5+ . . . +N9 +N10
В = ------------------------------------ - Nф .
7
Обчислити відношення А / В. Воно повиннео бути не менше 5.
Знайти нижню межу позитивних результатів ( Nm) для досліджуваних проб за формулою
Nm = 2,1 В + Nф .
Якщо кількість зареєстрованих лічильником імпульсів при вимірі активності в досліджуваній пробі перевищує розмір Nm , то даний зразок сироватки або плазми розглядається, якщо містить НВsАg .
Аналітичні характеристики набору.
Мінімальна концентрація НВsАg, яка може бути отримана за допомогою набору, становить 5.10-9 г/мл.
Специфічність.
Всі негативні результати, отримані за допомогою набору, є істинно негативними.
Серед позитивних результатів аналізу можливі " хибно-позитивні". Причини " хибно- позитивних" відповідей можуть бути такими:
забруднення проб матеріалом позитивних зразків;
радіо активне забруднення пробірок;
недостатнє промивання пробірок після інкубації з 125I - НВsАg.
Припускається постановка аналізу невідомої сироватки без дублювання.
Всі позитивні результати, отримані при постановці аналізу без дублювання, й усі випадки розбіжностей результатів постановки в дублікатах рекомендується перевіряти повторною постановкою аналізу.
Якщо при повторній постановці позитивні результати підтверджуються, то їх слід вважати істинно позитивними, а якщо не підтверджуються - " хибно-позитивними" і розцінювати як негативні.
Особливості застосування набору. Якщо в процесі експлуатації набір використовується кілька разів, то при кожній постановці необхідно знову провести аналіз трьох позитивних і семи негативних контрольних проб і результати обробити відповідно до інструкції.
Для одержання надійних результатів необхідно суворе дотримання інструкції для застосування набору і кваліфіковане проведення аналізу.
Умови та термін зберігання. Набір зберігати у темному сухому місці при температурі 2-8 0С протягом 45 діб з дати виготовлення або при температурі до 25 0С протягом не більше 5 діб.
У випадку неповного використання компонентів набору можливе їх багаторазове використання протягом всього терміну придатності при дотриманні умов зберігання.
Поставляються тільки в спеціалізовані медичні заклади, що мають дозвіл на роботу з радіоізотопними препаратами.
Умови відпуску. За рецептом.
Упаковка.
Рідкі реактиви, що входять до складу набору, розфасовують у скляні флакони, закривають гумовими пробками і обжимають алюмінієвими ковпачками.
Пластмасові пробірки з імобілізованим антитілами до НВзАg вміщені в поліетиленовий пакет. Пакет запаяний.
Флакони з рідкими реактивами і пакет з пробірками владені в гнізда коробки з пенополістиролу, внутрішня поверхня кришки коробки має гнізда для установки пробірок у процесі експлуатації набору.
Набір у коробці з пенополістиролу та експлуатаційна документація до нього (паспорт і інструкція для застосування набору) вкладені в коробку з картону.
Виробник. Підприємство " Радіо препарат" Інституту ядерної фізики Академії наук Республіки Узбекистан. Источник
Адреса. Республіка Узбекистан, 702132, м. Ташкент, Мірзо-Улугбекський район, сел. Улугбек.