І Н С Т Р У К Ц І Я
для медичного застосування
ДІАГЛЮК-2
НАБІР РЕАКТИВІВ
ПРИЗНАЧЕННЯ
Набір використовується для кількісного аналізу глюкози в біологічних рідинах (цільній крові, плазмі, сироватці) і призначений для використання в клініко-діагностичній та науково-дослідній практиці.
Набір розраховано на 100 аналізів (при об’ємі проб 4 мл).
Набір зберігати при температурі від 00С до +80С.
ПРИНЦИП МЕТОДУ
Глюкоза при дії глюкозооксидази окислюється киснем повітря до глюконової кислоти та перекису водню. Останній у с упряженій пер оксидазній реакції окислює хромоген до кольорового продукту, який визначається фотометрично.
РЕАКТИВИ
1. " Реагент". Суха суміш глюкозооксидази, пер оксидази, хромогену із складниками фосфатного буферу (2,75 г).
2. " Стандарт". Калібру вальний розчин глюкози, 10 ммоль/л (стабілізований).
Додатковий реактив: 0,8 М НСІ (концентровану соляну кислоту розводять у 15 разів водою: 10 мл кислоти + 140 мл води).
ДОПУСТИМІ ВЕЛИЧИНИ ВМІСТУ ГЛЮКОЗИ
В БІОЛОГІЧНИХ РІДИНАХ ЛЮДИНИ
Сироватка та цільна кров – від 4,22 до 6,11 ммоль/л.
Відтворювальність (коефіцієнт варіації) – від 5 до 7%.
Лінійність калібрувальної кривої - до концентрації глюкози 50 ммоль/л у вихідній пробі.
ПРИГОТУВАННЯ РОБОЧОГО РЕАГЕНТУ
" Реагент". Вміст флакона 1 розчинити в 350 мл дистильованої води. Каламутність розчину не заважає ходу аналізу і зникає після обробки проб соляною кислотою.
Зберігається розчин при температурі від 00С до +80С у темному місці до 3 діб. Поява блакитного відтінку в розчині реагенту не знижує його якості.
Примітка: При проведенні меншого числа аналізів в розрахунку на кожен аналіз зважують (27,5±1) мг реагенту і розчиняють в 3,5 мл води.
ПРОВЕДЕННЯ АНАЛІЗУ
Довжина хвилі - 450 нм (спектрофотометр або фотоколориметр).
Кювети - 1 см.
Температура інкубації - кімнатна (близько 200С).
1. СИРОВАТКА КРОВІ
Аналіз проводять серійно по 10-30 дослідних проб із постановкою в кожній серії калібрувальної та сліпої проб за такою схемою:
| Розчин |
Дослідна проба |
Калібрувальна проба |
Сліпа
проба |
| Сироватка, мл |
0,02 |
- |
- |
| Калібру вальний розчин глюкози (10 ммоль/л), мл |
- |
0,02 |
- |
| Реагент, мл |
3,5 |
3,5 |
3,5 |
Реакцію запускають додаванням робочого реагенту в точно фіксований час із інтервалом, наприклад, в 30 сек між пробами.
Зупиняють реакцію через 10 хв інкубації при кімнатній температурі додаванням до всіх проб по 0,5 мл 0,8 М НСl у тій же часовій послідовності, яка витримувалась при внесенні робочого реагенту.
Проби фотометрують при 450 нм проти сліпої. Реакційна суміш перед додаванням кислоти має блакитне забарвлення, яке в кислому середовищі переходить у жовте.
Розрахунок концентрації глюкози (в ммоль/л) у кожній серії проводять за формулою:
С = Ед/Екл х 10,
де Ед і Екл - оптичні густини дослідної та калібрувальної проб, відповідно, виміряні проти сліпої проби.
10 - концентрація глюкози в калібрувальному розчині, 10 ммоль/л
2. ЦІЛЬНА КРОВ
У невеликі скляні пробірки із 0,9 мл стабілізуючого розчину вносять по 0,1 мл щойно взятої із пальця крові. Проби центрифугують для осадження еритроцитів при 2000 об./хв протягом 10 хв. Для аналізу використовують над осадову рідину.
Склад стабілізуючого розчину: 134 мг щавелевокислого натрію, 850 мг хлористого натрію розчиняють у 100 мл води. Розчин стабільний не менше одного тижня при температурі від 0 до +80С. В якості стабілізатора можливе використання тільки фізіологічного розчину (0,9% NaCI).
Аналогічно обробляють сліпу та калібрувальну проби:
| Розчин |
Дослідна проба |
Калібрувальна проба |
Сліпа
проба |
| Фізіологічний розчин, мл |
0,9 |
0,9 |
0,9 |
| Кров, мл |
0,1 |
- |
- |
| Калібру вальний розчин глюкози (10 ммоль/л), мл |
- |
0,1 |
- |
| Вода, мл |
- |
- |
0,1 |
Аналіз проводять серійно по 10-30 дослідних проб із постановкою в кожній серії калібрувальної та сліпої проб за такою схемою:
| Розчин |
Дослідна проба |
Калібрувальна проба |
Сліпа
проба |
| Над осадова рідина (відповідна для кожної проби), мл |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
| Робочий реагент, мл |
3,5 |
3,5 |
3,5 |
Реакцію запускають додаванням робочого реагенту в точно фіксований час із інтервалом, наприклад, в 30 сек між пробами.
Зупиняють реакцію через 10 хв інкубації при кімнатній температурі додаванням до всіх проб по 0,5 мл 0,8 М НСІ у тій же часовій послідовності, яка витримувалась при внесенні робочого реагенту.
Проби фотометрують при 450 нм проти сліпої. Реакційна суміш перед додаванням кислоти має блакитне забарвлення, яке в кислому середовищі переходить у жовте.
Розрахунок концентрації глюкози (в ммоль/л) у кожній серії проводять за формулою:
С = Ед/Екл х 10,
де Ед і Екл - оптичні густини дослідної та калібрувальної проб, відповідно, виміряні проти сліпої проби.
10 - концентрація глюкози в калібрувальному розчині,10 ммоль/л
Примітка: При наявності в лабораторії фотоелектроколориметра із зменшеним об’ємом фотометрованих проб (0,5-1,0 мл), наприклад, " Мефан-8001", можно пропорційно зменшити дозу реагентів на всіх етапах визначення.
Термін зберігання. 1 рік.
Упаковка. По 2 флакони у коробці.
Виробник. Інститут біології клітини НАН України. Источник
Адреса. Україна, м. Львів, вул. Драгоманова, 14/16.